GS组织标本制备及切片染色套液的使用体会

GS组织标本制备及切片染色套液的使用体会

赵一岭 王文勇 马福成 王伯沄

第四军医大学基础部病理学与病理生理学教研室暨西京医院病理科

摘自：2011年06期《诊断病理学杂志》

随着******各国对人类健康的关注程度不断增加，我国对环保的要求也日趋严格。目前各种实验室的环保问题已经提到了议事日程，其中也包括我们组织病理学实验室。人们都非常渴望使用环保试剂，尽量减少化学品对人类的危害。***直接有效的办法就是使用环保试剂。目前国内环保产品的种类还不是很多，能选择范围十分有限。而国外环保产品，价格很贵，对多数实验室而言感到非常******。除此之外，我们对环保产品的了解也非常肤浅，在解决环保问题上还需要下大力气。***近我们实验室应用了由哈尔滨格林标本技术开发有限公司研制并生产的GS组织样本制备套液及GS病理切片染色套液，总的来说试剂比较稳定，结果可靠，我们使用的基本情况如下。

 1. 材料和方法

  1.1 标本

临床病理来源的人体组织，有脂肪，淋巴结，乳腺癌，肾脏，皮肤，和肝脏等；动物大、小鼠主要脏器及皮肤、肌肉，骨组织等。

  1.2方法

标本取材厚度大约0.3-0.4cm，组织大小0.2×1.5×2cm左右。骨组织大多数经过酸性脱钙液脱钙其中有少部分经过螯合剂EDTA脱钙。而后采用GS组织样本制备套液进行组织处理。根据试剂说明书的要求在Leica1050脱水机程序里进行了时间设置，组织经GS试剂处理后，孝感亚光包埋机包埋，Leica2135石蜡切片机切片。GS试剂组织脱水程序设置表（见表1），以及储存瓶对应试剂表（见表2）。切片厚度4微米，采用 GS染色套液进行HE染色，按照说明书程序执行（见表3、4）。

表1   Leica1050脱水机GS试剂应用时间设置表

序号	脱水机菜单试剂	时间		对应液体储存瓶
1	Formalin	1	小时	GS无醛固定液Ⅰ
2	Formalin	3	小时	GS无醛固定液Ⅰ
3	75%乙醇	5	分钟	75%乙醇
4	90%乙醇	5	分钟	90%乙醇
5	ABS	30	分钟	GS脱水剂Ⅰ
6	ABS	1	小时	GS脱水剂Ⅰ
7	ABS	30	分钟	GS脱水剂Ⅱ
8	ABS	1	小时	GS脱水剂Ⅱ
9	Xylene	1	小时	GS透明剂
10	Xylene	2	小时	GS透明剂
11	Paraffin	2	小时	GS-石蜡（5号）
12	Paraffin	2	小时	Leica石蜡
13	Paraffin	1	小时	Leica石蜡

 

 

表2   储存瓶对应试剂表

 

表3  GS常规石蜡组织切片HE染色程序表

序号	GS	时间
1	GS脱蜡液Ⅰ	10min
2	GS脱蜡液Ⅰ	10min
3	GS脱蜡液Ⅱ	2min
4	95%乙醇	10s
5	自来水冲洗	2min
6	GS苏木精液	3min
7	GS分化液	2min
8	自来水缓流清洗	2s
9	GS蓝化液	10s
10	自来水缓流清洗	2min
11	GS伊红液	1min
12	自来水缓流清洗	2min
13	GS除浮液	3s
14	无水乙醇	20s
15	沥干
16	GS除水透明液	1min
17	沥干
18	GS透明液	2min
19	GS封片胶封片

表4   肌肉活检组织冰冻切片GS常规H.E染色程序表

序号	GS	时间
1	GS固定液	2min
2	自来水缓流清洗	3s
3	GS苏木精液	2min
4	自来水缓流清洗	2min
5	GS伊红液	1min
6	自来水缓流清洗	3s
7	GS除浮染液	3s
8	沥干
9	GS透明液	1min
10	GS封片胶封片

 

2. 结果

传统试剂和GS试剂脱水处理的组织切片和染色初步比较没有发现不良现象。脂肪组织和皮肤切片要好于传统试剂脱水处理的组织块。切片和展片均比较容易。GS试剂处理石蜡组织切片常规切片厚度4微米，HE染色GS试剂按照说明书程序执行，切片染色良好，伊红颜色鲜艳，着色均匀一致，细胞核染色清晰，没有过染和着色不良现象，细胞核和细胞浆上色均好，对比明显，未发现组织和细胞有收缩或肿胀。

本实验室利用GS处理的组织石蜡切片进行了H.E染色、Giemsa 、PAS、网状纤维 Gordon-Sweet、胶原纤维 V.G和Masson染色。均获得了比较满意的结果（见图3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13）。

 3.讨论

自从显微镜发明和利用后，1858年德国医生和细胞学家R.Virchow以及1893年德国人施旺（T,Schwann）创立了细胞学说。才使生物组织和细胞形态研究近百年有了飞跃的发展，应该归功于组织固定、包埋、切片和染色技术的发明和不断的进步。甲醛固定、石蜡切片和HE染色已成为生命科学（人类，动植物）形态学观察应用的金标准方法，作为全******通用的常规技术，为人类、动物和植物组织细胞形态学研究作出了巨大的贡献。但是，石蜡切片和HE染色方法中所用苯、甲苯和二甲苯、组织固定剂甲醛等对人和环境都十分有害。

二甲苯的侵入途径主要是吸入或经皮肤吸收。短期内吸入高浓度二甲苯可出现上呼吸道明显的刺激症状、眼结膜及咽充血、头晕、恶心、呕吐、胸闷、四肢无力、意识模糊、步态蹒跚，重者可有躁动，抽搐或昏迷，有的可能出现癔病样发作。长期接触有可能出现神经衰弱综合征，女性出现月经异常，常出现皮肤干燥、皲裂、皮炎。

甲醛入侵途径与二甲苯相同，刺激呼吸道黏膜和眼结膜，强烈的刺激可引起呼吸困难和眼睛流泪。皮肤接触可引起皮炎、皲裂难以******。在化学品安全数据表中甲醛被列为致癌剂。

多年来病理工作者处在二甲苯和甲醛危害之中，由于没有更好的代用品，病理工作者难以摆脱二甲苯和甲醛的危害。国内外病理工作者都在试图寻找一种较为理想的代用品，既环保又能有效代替二甲苯和甲醛的作用来满足病理工作的需要。值得注意的是近几年来国内外市场上出现了一些二甲苯和甲醛的代用品，例如，Van-clear环保透明剂、Clear-Advantage Xylene Substitute Polysciences, Inc.、XS-3™, Xylene Substitute Statlab、NEO-CLEAR® ( 二甲苯替代剂 ) Merck、Zinc Fixative等。环保试剂正在少数实验室里应用，由于价格较贵，货源少，有的代用品作用确实还赶不上二甲苯和甲醛的效果。此外，人们对代用品的性能缺乏了解，到目前为止多数病理实验室还在沿用传统试剂固定和脱水处理。对环保试剂还处于认识阶段，还没有普及应用，病理工作人员还没有真正走进环保的保护区。

因此，对代用品提出了更高的挑战。无论哪种代用品只要效果和二甲苯、甲醛相同，价格便宜，质量可靠的代用品，才能得到推广。代用品的质量能够让行业内大多数人信任才能真正实现普及应用。这样的代用品才能具有较强的生命力。

哈尔滨格林标本技术开发有限公司******在国内推出环保型GS组织样品制备及切片染色套液，它们的产品有组织处理系列（图1）GS无醛固定液、组织脱水Ⅰ、组织脱水Ⅱ、组织透明Ⅰ、组织透明Ⅱ、石蜡5号和石蜡6号，其中包括自动脱水机的清洗液。组织切片H.E染色系列（图2）有切片脱蜡液Ⅰ（GS-07）、切片脱蜡液Ⅱ（GS-08）、苏木精液（GS-09）、伊红（GS-10）、除浮染液（GS-11）、除水透明液（GS-12）、切片透明液（GS-13）、还有封片胶（GS-02）。该公司的宗旨是健康、环保、优质、******。我们相信有这样的理念一定能为组织实验室提供有力的环保支持。这是向百年形成的国际通用的常规技术的挑战。

总之，GS环保试剂性能比较稳定，H.E染色结果可靠。完全可以替代甲醛、二甲苯作为常规组织固定、石蜡切片和HE染色。也适用于多种特殊染色。具有创新和推广价值。可以向国内外申请专利，扩大市场。在此，衷心感谢哈尔滨格林标本技术开发有限公司为病理同行作出的努力，希望贵公司为全国乃至全******病理同行开创一个无害环保的新******。

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添加时间：2016-04-01 点击量：2070